ساخت و بهينه سازي کيت مولتي پلکس تشخيص بيماري ويروسي لکه سفيد(WSSV)در ميگو

پذير، محمدخليل

مرکز فناوری اطلاعات و اطلاع رسانی کشاورزی

منو

رکورد قبلی

رکورد بعدی

" ساخت و بهينه سازي کيت مولتي پلکس تشخيص بيماري ويروسي لکه سفيد(WSSV)در ميگو "
پذير، محمدخليل

شماره شناسایی	:	18873985
شماره مدرک	:	۶۱۵۶۰
نام عام مواد	:	[گزارش نهایی -ویژه]
شناسه افزوده	:	پذير، محمد خليل
	:	حسيني سالکده، سيدقاسم
	:	معظمي، لاله
	:	ذريه زهرا، سيدمحمدابراهيم جليل
	:	آئين جمشيد، خسرو
	:	ميربخش، مريم
	:	قاسمي، سيد احمد
	:	اژدري، اشکان
	:	دشتيان نسب، عقيل
	:	سيمروني، محمد مهدي
	:	احمدي، امير حسين
	:	سيدمرتضائي، سيدرضا
	:	حافظيه، محمود
	:	سپهداري، ابوالفضل
	:	حبيبي، محمد
	:	قائدنيا، بابک
	:	حسين نژاد لزرجاني، اسکندر
	:	کاکولکي، شاپور
	:	احمدي، بهرام
	:	نوروزي، زينب
	:	آبسالان فرد، کامران
	:	محمدي، احترام
	:	نظاري، محمدعلي
	:	ابراهيمي حسيني، سحر
	:	بحراني، مرتضي
عنوان اصلي	:	ساخت و بهينه سازي کيت مولتي پلکس تشخيص بيماري ويروسي لکه سفيد(WSSV)در ميگو
نام نخستين پديدآور	:	پذير، محمدخليل
عنوان اصلي به زبان ديگر	:	Manufacturing and optimization of multiplex kit for the detection of white spot syndrome virus (wssv) in shrimp
وضعیت انتشار	:	تهران: موسسه تحقيقات علوم شيلاتي کشور، ۱۴۰۱
فروست	:	شماره ثبت ۶۱۵۶۰ مورخ ۱۴۰۱/۰۲/۲۶۶۱۵۶۰
	:	شماره طرح : 2-80-12-025-981149
	:	سامانه سمپات
توصیفگر	:	ویروس لکه سفید
	:	کیت مولتی‌پلکس
	:	تشخیص مولکولی
	:	پرایمر
	:	سویه
شماره ثبت	:	۴۶۸۹
خلاصه یا چکیده	:	بیماری ویروسی لکه سفید از جمله بیماری‌هایی بوده که در طول 15 سال گذشته منجر به تحمیل هزینه‌های هنگفتی به صنعت تکثیر و پرورش میگو شده است. با توجه به عدم امکان درمان این بیماری، تشخیص به موقع و سریع بیماری در مراکز تکثیر و پرورش میگو با استفاده از کیت‌های تشخیص مولکولی PCR از جمله روش‌های پیشگیری از شیوع بیماری است. از سوی دیگر با توجه به عدم وجود محصول داخلی با کارایی تشیخص بالا، بیشتر مراکز آزمایشگاهی آبزیان در کشور بالاجبار از محصولات وارداتی نظیر کیت تشخیص بیماری ویروسی لکه سفید IQ2000-WSSV استفاده می‌نمایند. در این مطالعه سعی شد بر اساس توالی‌های مربوط به سویه‌های مختلف ویروس لکه سفید (چین، تایلند، تایوان و کره) و پروتئین‌های بیماریزای ویروس (VP28, VP19) پرایمر‌های مختلف طراحی گردند. همزمان پس از بهینه سازی درجه حرارت و تنظیم سیکل‌های واکنش زنجیره‌ای پلیمراز هر یک از پرایمر‌های طراحی شده، محصولی تولید شد که قادر به تشخیص یک کپی از ویروس لکه سفید در نمونه با دقت بالا همراه با تکرار پذیری و اختصاصیت می‌باشد. این محصول قادر است در مدت زمان حداکثر 5/3 ساعت از زمان استخراج DNA ویروس شناسایی را انجام دهد. کیت مولتی‌پلکس طراحی شده حاول یک بافر M و P همراه با نمونه‌های کنترل مثبت و منفی می‌باشد. دستورالعمل اجرایی کیت طراحی شده جهت شناسایی ویروس بدین صورت است که بعد از مخلوط نمودن 15 میکرولیتر بافر M و 14 میکرولیتر بافر P به ازای هر نمونه در میکروتیوب‌های‌ 2/0 میلی‌لیتری استریل و افزودن 1 میکرولیتر DNA استخراج شده از نمونه‌های مجهول با غلظت 400-200 نانوگرم/میکرولیتر، مثبت بودن نمونه‌ها مشروط به تکثیر هر یک از قطعات 615، 300 و 200 جفت باز و منفی بودن آنها ناشی از روئت قطعه 999 جفت است.
	:	White spot virus disease is one of the diseases that has led to huge costs to the shrimp industry over the past 15 years. Due to the impossibility of treating this disease, timely and rapid diagnosis of the disease in shrimp hatchery centers and shrimp farming using molecular PCR diagnostic kits is one of the methods to prevent the spread of the disease. On the other hand, due to the lack of a domestic product with high detection efficiency, most aquatic laboratory centers in the country are forced to use imported products such as iq2000 WSSV detection kit. In this study, different primers were designed based on sequences related to different strains of white spot virus (China, Thailand, Taiwan and Korea) and virus proteins (VP28, VP19). Simultaneously, after optimizing the temperature and adjusting the polymerase chain reaction cycles of each of the designed primers, a product was produced that is able to detect a copy of the white spot virus in the sample with high accuracy with reproducibility and specificity. This product is able to detect the virus within a maximum of 3.5 hours from the time of DNA extraction. The multiplex kit is designed to contain an M and P buffer with positive and negative control samples.The operating instructions of the kit designed to detect the virus are as follows: after mixing 15 μl of M buffer and 14 μl of P buffer per sample in 0.2 ml sterile micro tubes and adding 1 μl of DNA extracted from unknown samples at a concentration of 200-400 ng/μl, the positive of the samples is conditional on the amplification of each of the 615, 300 and 200 bp products and their negative is due to the observation of the 999 bp fragment.