|
" تولید VLP از ویروس HPV جهت ارزیابی به‌عنوان کاندیدای واکسن پاپیلومای انسانی "
| شماره شناسایی
|
:
|
18870962
|
| شماره مدرک
|
:
|
۶۰۷۰۰
|
| نام عام مواد
|
:
|
[گزارش نهایی -ویژه]
|
| شناسه افزوده
|
:
|
آقائی‌پور، خسرو
|
|
|
:
|
سنچولی، علیرضا
|
|
|
:
|
عالی، محسن
|
| عنوان اصلي
|
:
|
تولید VLP از ویروس HPV جهت ارزیابی به‌عنوان کاندیدای واکسن پاپیلومای انسانی
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
:VLP production from human Papiloma Virus (HPV) for study as human popiloma virus candidate
|
| صفحه شمار
|
:
|
۱۱۴ ص.:مصور(عکس‌رنگی)، جدول، نمودار
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج: موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، ۱۴۰۰
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۶۰۷۰۰ مورخ ۱۴۰۰/۰۹/۱۱۶۰۷۰۰
|
|
|
:
|
شماره طرح ۹۶۰۹۴۲-۰۸۶-۱۸-۱۸-۲
|
|
|
:
|
شماره نامه: سامانه سمپات
|
|
|
:
|
این طرح بنیادی است
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
پاپیلوما ویروس انسانی ویروسی است که آلودگی با آن میتواند باعث سرطانهای دستگاه تناسلی شود. بدلیل هزینه و قیمت بالای واکسن بر علیه این ویروس، این واکسن در کشورهای درحال پیشرفت در دسترس عموم نیست. در کشور ما واکسیناسیون با این واکسن تاکنون مقدور نگردیده است. هدف این مطالعه تولید پروتئینهای L1 نوترکیب در سیستم بیانی یوکاریوتیک پیشیا پاستوریس که مناسب برای تولید واکسن های انسانی است میباشد. مواد و روشها: برای ارزیابی تشکیل ساختارهای شبه ویروس که از پروتئین نوترکیبL1 و L1/L2 کایمریک بدست آمده، ابتدا یک اپیتوپ وسیع الطیف از ژن L2 پاپیلوما ویروس انسانی 16 درون ژن L1 پاپیلوما ویروس انسانی 16 وارد گردید. سپس پلاسمیدهای نوترکیب L1 HPV-16 pPICZA و L1/L2 HPV-16 pPICZA در مخمر پیشیا پاستوریس بیان گردید. بیان پرتئین بروش SDS-PAGE و western blot مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس تشکیل ساختارهای خالص شده شبه ویروسی با استفاده از میکروسکوپهای atomic-force و TEM مورد مشاهده قرار گرفت. در نهایت واکنش پروتئین با سرمهای HPV مثبت و آنتی بادی های تجاری L1 و L2 به روش ELISA مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: نتایج نشان داد که پروتئینهای L1 و نوترکیب L1/L2 در مخمر پیشیا پاستوریس بیان گردیده بود. تشکیل ساختارهای شبه ویروسی به روش atomic-force و TEM مشاهده و تایید گردید. واکنش پروتئینها با آنتی بادیها سرمی و آنتی بادیهای تجاری بروش ELISA وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: این مطالعه راه ساخت واکسن pan-HPV را هموار کرد. آن بنظر میرسد که استفاده از TEM و AFM مزایای منحصربفردی دارند که استفاده هر دو با هم در مشاهده ساختارهای شبه ویروسی یکدیگر را پوشش میدهند.کلمات کلیدی: پاپیلوماویروس انسانی، بیان ژن، پروتئین ریکامبیننت، الیزا، میکروسکوپ الکترونی، VLP،Atomic force microscopy
|
|
|
:
|
Human papillomavirus causes genital cancers. Due to high cost, the current HPV vaccines are not affordable in developing countries. This study was aimed to produce a L1 protein and a chimeric L1 protein in a less expensive expression system. Materials and Methods: To test the formation of VLPs retrieved from chimeric L1/L2 protein HPV-16, first, a cross-neutralizing epitope of HPV-16 L2 gene was inserted into L1 gene. Next, the chimeric L1/L2 HPV-16 pPICZA plasmid and chimeric L1 HPV-16 pPICZA plasmid were expressed in Pichia pastoris (P. pastoris). Then, the expression of proteins was tested by SDS-PAGE and western blot analyses. After that, the formation of purified VLPs was visualized using atomic-force and electron microscopies. Finally, reaction with positive HPV sera and commercial antibodies was tested using ELISA method. Results: The results proved the expression of chimeric L1/L2 HPV-16 protein in P. pastoris. The formation of VLPs was observed by atomic-force and electron microscopies. Reaction with antibody was confirmed with HPV positive sera Using ELISA and Western-blot Methods. Discussion: The present study will pave the way for producing recombinant pan-HPV vaccine. In addition, it seems TEM and AFM have distinctive advantages which complete each other for visualizing the VLP formation. Key words:HPV. L1, L2, Gene expression, Recombinant protein, ELISA, electronic Microscope, VLP and Atomic forc microscopy
|
| |