|
" بيان و ارزيابي پروتئين P32 ويروس کاپري پاکس مورد استفاده در روشهاي سرولوژي "
| شماره شناسایی
|
:
|
18868393
|
| شماره مدرک
|
:
|
۶۰۲۲۶
|
| شناسه افزوده
|
:
|
ابراهیمی جم، محمدحسن
|
|
|
:
|
بخشش، مهران
|
| عنوان اصلي
|
:
|
بيان و ارزيابي پروتئين P32 ويروس کاپري پاکس مورد استفاده در روشهاي سرولوژي
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
:Expression and evaluation of capripoxvirus P32 protein using in serological methods
|
| صفحه شمار
|
:
|
۵۸ ص.:مصور، عکس(رنگی)، جدول، نمودار
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج: موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی ، ۱۴۰۰
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۶۰۲۲۶ مورخ ۱۴۰۰/۰۶/۲۳۶۰۲۲۶
|
|
|
:
|
شماره طرح ۹۷۰۶۴۱-۰۴۷-۱۸-۱۸-۲
|
|
|
:
|
شماره نامه: سامانه سمپات
|
|
|
:
|
این طرح: بنیادی است
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
این پژوهش با هدف راه‌اندازی سیستم الایزا بر اساس پروتئین نوترکیب P32 ویروس آبله بزی برای تشخیص آنتی بادی ضد کپری¬پاکس ویروس¬ها طراحی شده بود. پروتئین P32 با استفاده از وکتورpET24a+ در باکتری اشرشیاکلی سویه Rostta بیان و با استفاده از روش‌های SDS-PAGE و وسترن‌بلاتینگ ارزیابی شد. سپس پروتئین نوترکیب تهیه شده خالص شد و برای راه‌اندازی الایزای اختصاصی ویروس‌های کپری پاکس مورد استفاده قرار گرفت. از روش تیتراسیون چکربورد و آنالیز ROC به¬ترتیب برای بهینه‌سازی سیستم الایزا و تعیین اختصاصیت و حساسیت آن استفاده شد. پتانسیل تشخیصی سیستم الایزای طراحی‌شده با استفاده از سرم‌های کنترل مثبت و منفیِ جمع‌آوری شده از بز، گوسفند و گاو ارزیابی شد. نتایج نشان داد که پروتئین کامل P32 Full-length P32)) به میزان ناچیزی بیان شد. در حالی‌که پروتئین کوتاه شده P32(Truncated.P32)تا سطح 5/1-35/1 میلی‌گرم به ازای هر لیتر محیط کشت بیان شد. نتایج بهینه‌سازی با روش چکربورد نشان داد که استفاده از 675 نانوگرم پروتئین خالص Tr.P32 به ازای هر چاهک و رقت 1:10 از سرم‌های کنترلی بیشترین اختلاف در جذب نوری بین نمونه‌های سرمی مثبت و منفی بزی را در پی داشت. پروتئین نوترکیب Tr.P32 واکنش خوبی با آنتی‌بادی ضد ویروس‌های آبله بزی، آبله گوسفندی و لامپی¬اسکین داشت، درحالی‌که هیچ‌گونه واکنش متقاطعی با آنتی بادی ضد ویروس اکتیمای واگیر نشان نداد. با مقایسه نتایج الایزا با شاخص خنثی‌سازی، cut off، حساسیت و اختصاصیت تشخیصی سیستم الایزای طراحی شده به ترتیب 397/0، 94 درصد و 6/96 درصد اندازه‌گیری شد. این یافته‌ها نشان داد که سیستم الایزای طراحی‌شده بر اساس پروتئین نوترکیب Tr.P32 می¬تواند در تشخیص سرمی ویروس‌های کپری پاکس مورد استفاده قرار گیرد.واژگان کلیدی: الایزا، آبله بزی، آبله گوسفندی، لامپی اسکین، کپری¬پاکس، پروتئینP32
|
|
|
:
|
Expression and evaluation of capripoxvirus P32 protein using in serological methodsLumpy skin disease (LSD), sheep pox (SPP) and goat pox (GTP) are associated with a profound adverse effect on husbandry sector. This study was aimed to develop an ELISA system based on recombinant full-length and truncated P32 protein (Tr.P32) of goat pox virus. The P32 protein was expressed in Rosetta strain of E. coli using pET24a+ vector and evaluated by SDS-PAGE and Western blotting. Then purified Tr.P32 was used to develop a Capripoxvirus specific ELISA. The checker board titration and receiver-operating characteristic (ROC) analysis were used to optimize ELISA system and determination of diagnostic specificity and sensitivity, respectively. The diagnostic potential of developed ELISA was evaluated using positive and negative control sera, collected from goat, sheep and cattle. Although expression level of full-length P32 recombinant protein was negligible, Tr.P32, a ~ 31 kDa recombinant protein, was expressed up to 1.35-1.5 mg/L of culture media. The results of checkerboard titration revealed that 675 ng/well of Tr.P32 antigen and 1:10 dilution of control sera caused maximum difference in absorbance between positive and negative goat sera. The recombinant Tr.P32 showed good reactions with antibodies against GTP virus (GTPV), SPP virus (SPPV) and LSD virus (LSDV), whereas no cross reactions with anti Orf virus antibody was detected. By comparison with neutralization index (NI), cut off, diagnostic sensitivity and specificity of the developed indirect-ELISA were estimated, 0.397, 94% and 96.6%, respectively. These finding indicated that ELISA system based on Tr.P32 protein potentially could be used in sero-surveillance of all Capripox viruse.Keywords: ELISA, Goat pox, Lumpy skin disease, P32 Protein, Sheep pox
|
| |