|
" راه اندازي الايزاي غیرمستقیم با آنتي ژن تولیدي در موسسه رازي جهت شناسايي گاوهاي واكسینه با واكسن بروسلا آبورتوس سويه ايريبا (RB51) "
| شماره شناسایی
|
:
|
18868025
|
| شماره مدرک
|
:
|
۶۰۰۳۹
|
| نام عام مواد
|
:
|
[گزارش نهایی -تجاری]
|
| شناسه افزوده
|
:
|
خفری، ابوالفضل
|
|
|
:
|
بهروزیخواه، علی محمد
|
|
|
:
|
میرجلیلی، علی
|
|
|
:
|
عالمیان، سعید
|
|
|
:
|
جلالی، حمیدرضا
|
|
|
:
|
تبیانیان، مجید
|
| عنوان اصلي
|
:
|
راه اندازي الايزاي غیرمستقیم با آنتي ژن تولیدي در موسسه رازي جهت شناسايي گاوهاي واكسینه با واكسن بروسلا آبورتوس سويه ايريبا (RB51)
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
:Developing an indirect ELISA to detect cows vaccinated with Brucella abotus strain IRIBA (RB51) using an antigen produced in Razi Institute
|
| صفحه شمار
|
:
|
۶۸ ص.:مصور، عکس(رنگی)، جدول، نمودار
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج، ۱۴۰۰
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۶۰۰۳۹ مورخ ۱۴۰۰/۰۵/۱۹۶۰۰۳۹
|
|
|
:
|
شماره طرح ۹۱۱۸-۱۸-۱۸-۲
|
|
|
:
|
شماره نامه: سامانه سمپات
|
|
|
:
|
این طرح: بنیادی است
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
بروسلوز از بیماریهای باکتریایی قابل انتقال از دامها به انسان میباشد که توسط عوامل جنس بروسلا ایجاد میشود. بیماری گسترش جهانی داشته و از دو جنبه سلامت همگانی و اقتصادی حائز اهمیت بسیار است. بروسلا آبورتوس عامل اصلی ایجاد این بیماری در گاو بوده که بومی ایران میباشد. در حال حاضر در کشور از واکسن زنده تخفیف-حدت¬یافته بروسلا آبورتوس سویه RB51 (که با نام تجاری ایریبا توسط مؤسسه رازی تولید میگردد) به منظور ایمن-سازی گاوها و گوساله¬ها جهت کنترل و پیشگیری از بیماری در این گونه دامی استفاده میگردد. این سویه واکسن دارای فنوتیپ خشن بوده که پاسخهای آنتی بادی القایی توسط آن در تستهای معمول سرولوژیک قابل شناسایی نیست. از سوی دیگر به دلیل انجام واکسیناسیون توسط مراکز بخش خصوصی، پایش میزان موفقیت اجرای عملیات واکسیناسیون در ایجاد ایمنی گله¬ای توسط مراجع مسئول از اهمیت فراوان برخوردار است. برای اینکار لازم است پاسخهای ایمنی هومورال ایجاد شده متعاقب مایه¬کوبی، با یک روش عملی و مناسب ارزیابی شده که ایجاد این پاسخهای هومورال بیانگر مواجهه دام¬ها با سویه واکسن و در نتیجه صحت انجام واکسیناسیون میباشد. هدف پروژه حاضر راه¬اندازی آزمایش الایزای غیرمستقیم خانگی (In-house) با استفاده از آنتی¬ژن تولیدی لیپوپلی¬ساکارید خشن (R-LPS) سویه RB51، جهت شناسایی و ارزیابی پاسخ¬های آنتی¬بادی تلیسه¬ها پس از واکسیناسیون با این سویه بود. ابتدا R-LPS این سویه استخراج شد که با روشهای ایمنی-شیمیایی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس از این R-LPS به عنوان آنتی¬ژن جهت راه اندازی روش الایزای غیرمستقیم به منظور شناسایی پاسخهای هومورال متعاقب واکسیناسیون با این سویه استفاده شد. استخراج R-LPS سویه RB51 به روش فنل-کلروفرم-پترولیوم اتر انجام شده که موفقیت استخراج آن با استفاده از روشهای Lymulus amebocyte lysate (LAL)، الکتروفورز در ژل پلی¬آکریلامید (PAGE) و Agar gel immunodiffusion (AGID) مورد تأیید قرار گرفت. R-LPS استخراجی به عنوان آنتی ژن در داخل چاهک های پلیتهای الایزا Coat شده و با استفاده از سرم منفی و یک سرم مثبت قوی شرایط الایزا از نظر مقدار آنتی ژن، رقت سرم و مقدار کونژوگه با روش Checkerboard titration بهینه سازی گردید. با استفاده از 42 سرم منفی، 30 سرم مثبت و انجام آنالیز Receiver-operating characteristic میزان Cut-off value بصورت درصد مثبت بودن (Percent positivity) نسبت به سرم مثبت قوی برابر 8/45 در نظر گرفته شد که با این معیار حساسیت روش معادل 100 درصد و ویژگی آن برابر 6/97 درصد محاسبه گردید. ارزیابی پاسخ سرولوژی 5 رأس گوساله ماده پس از واکسیناسیون با سویه RB51 نشان داد پاسخهای سرولوژی یکماه پس از مصرف واکسن به پیک خود رسیده که پس از آن بتدریج تا ماه ششم پس از تزریق روندکاهشی دارد. بر اساس نتایج بدست آمده بهترین زمان برای شناسایی دامهای واکسینه یک تا سه ماه پس از تزریق واکسن میباشد. بطور کلی مطالعه حاضر نشان داد از الایزای غیرمستقیم راه اندازی شده میتوان جهت شناسایی دامهای واکسینه با واکسن RB51 و شناسایی آنتی بادیهای القایی متعاقب واکسیناسیون با این سویه، استفاده نمود.کلمات کلیدی: بروسلا آبورتوس، بروسلوز، واکسن RB51، تشخیص، لیپوپلی¬ساکارید خشن، الایزا
|
|
|
:
|
Brucellosis is a bacterial zoonosis which is caused by Brucella organisms. The disease has a global distribution and is very important due to public health hazards and economic losses it imposes. Brucella abortus is the main cause of bovine brucellosis and is enzootic in Iran. The live attenuated vaccine of Brucella abortus strain RB51 (manufactured by Razi Institute as IRIBA vaccine) is currently used in Iran to immunize cows and calves against the disease. RB51 starin has a rough phenotype, thus antibodies induced against it are not recognized by routine serological tests. As vaccination campaign is implemented by private sector, controlling proper implementation of vaccination in herds by authorities is of paramount significance. For this purpose, humoral immune responses to vaccine strain should be identified by a practical method. Humoral responses following vaccination show exposure of animals to vaccine strain and hence confirm appropriate vaccination. The present project was performed to set up and develop an in-house indirect ELISA assay using rough lipopolysaccharide (R-LPS) of the vaccine strain as antigen for identification of antibody responses of heifers following vaccination with the strain. R-LPS of RB51 strain was extracted and characterized by immune-chemical methods. It was then used to develop the indirect ELISA assay for detection of post-vaccination humoral responses. R-LPS extraction by phenol-chloroform-petroleum ether method was successful proved by lymulus amebocyte lysate (LAL), polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and agar gel immunodiffusion (AGID). Extracted R-LPS was coated inside wells of ELISA plates as the antigen. ELISA reagents such as antigen, serum and conjugated antibody were optimized by checkerboard titration using a positive and a negative sera. Using a panel of 42 negative sera and a panel of 30 positive sera in the optimized ELISA assay developed, cut-off value (as percent positivity of the strong positive serum) and also sensitivity and specificity of the assay were determined by receiver-operating characteristic analysis which were 45.8%, 100% and 97.6%, respectively. Evaluation of the serological responses of 5 heifers after vaccination with RB51 vaccine showed that a month post-vaccination all animals became positive in the developed in-house ELISA assay with the highest antibody titers which had a decreasing trend afterwards untill 6 months post-vaccination. According to our results, RB51-vaccinated animals could be identified from 1 to 3 montha after vaccination. In general, our study showed the developed ELISA assay can be successfully used to identify vaccinated animals and evaluate post-vaccination antibody responses to the vaccine strain.Keywords: Brucella abortus, Brucellosis, RB51 vaccine, rough lipopolysaccharide, ELISA
|
| |