بررسی زمان استحصال ویروس در تخم مرغ های جنین دار تلقیح شده با سویه واکسینال V4 ویروس بیماری نیوکاسل با استفاده از تیتراسیون و روش Real time PCR

مرکز فناوری اطلاعات و اطلاع رسانی کشاورزی

منو

" بررسی زمان استحصال ویروس در تخم مرغ های جنین دار تلقیح شده با سویه واکسینال V4 ویروس بیماری نیوکاسل با استفاده از تیتراسیون و روش Real time PCR "

شماره شناسایی	:	18867877
شماره مدرک	:	۶۰۰۲۳
نام عام مواد	:	[گزارش نهایی -تجاری]
شناسه افزوده	:	قدیمی پور، رحیم
	:	آمقی رودسری، علی
	:	ابراهیمی، محمدمجید
	:	تقی زاده طرنابی، مرتضی
	:	هوشیاری، عارف
	:	موسویان، مهدی
	:	حسینی، حیدر
	:	صمدی زنوز، احد
	:	شکوهی، احمد
	:	حسین پور کلو، رزاق
	:	ازدیاری، مهدی
عنوان اصلي	:	بررسی زمان استحصال ویروس در تخم مرغ های جنین دار تلقیح شده با سویه واکسینال V4 ویروس بیماری نیوکاسل با استفاده از تیتراسیون و روش Real time PCR
عنوان اصلي به زبان ديگر	:	:Monitoring of virus harvesting time in embryonated chicken eggs inoculated with Newcastle disease virus V4 vaccine strain by titration and Real time PCR methods
صفحه شمار	:	۵۷ ص.:مصور، جدول، نمودار
وضعیت انتشار	:	کرج: موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، ۱۳۹۹
فروست	:	شماره ثبت ۶۰۰۲۳ مورخ ۱۴۰۰/۰۵/۱۹۶۰۰۲۳
	:	شماره طرح ۹۷۰۴۴۹-۰۲۲-۱۸-۸۱-۲
	:	شماره نامه: سامانه سمپات
	:	این طرح: مقدماتی است
خلاصه یا چکیده	:	نیوکاسل بیماری با واگیری بسیار بالا است که تنوع زیادی در نوع و شدت نشانه ها دارد. امروزه واکسیناسیون مناسب ترین روش پیشگیری از این بیماری بوده و در روند تولید واکسن های آن، اطلاع از شرایط رشد و تکثیر سویه های واکسینال ویروس و زمان استحصال آن از اهمیت بالایی برخوردار است. پژوهش جاری با هدف بررسی زمان استحصال ویروس در تخم مرغ های جنین دار تلقیح شده با سویه واکسینال V4 ویروس بیماری نیوکاسل (AUS/ND/V4/1993) طراحی گردید. بدین منظور، بعد از تهيه و عیارسنجي اولیه ویروس¬، جهت بررسي رشد و تكثير و نیز زمان استحصال این ويروس در جنين جوجه، صد میکرولیتر از رقت 3-10 ویروس به عنوان مایه تلقیح به حفره آلانتوئيك 96 تخم¬مرغ 10 روزه SPF تلقیح گردیده و تخم مرغ ها در دماي C º6/37 و رطوبت نسبي 65 درصد با حداكثر زمان انكوباسيون 96 ساعت انکوبه شدند. در طول انكوباسيون، با فواصل زمانی 6 ساعته، گروه های 6 عددی تخم مرغ ها از انكوباتور خارج شده و مایع آلانتوئیک آنها از نظر بار ویروسی عیار سنجی شد. بدین منظور از آزمون های سرولوژیک هماگلوتیناسیون( HA) و عفونت زایی 50 درصد جنین ها (EID50) و نیز آزمایش مولکولی Real time RT- PCR استفاده شد. نتایج مطالعه حاضر نشان داد عیار هماگلوتیناسیون مایع آلانتوئیک نمونه ها در بازه¬ زمانی (h 36-42) الی ( h90-96) بعد از تلقیح در عیار مناسب استحصال آنتی ژن قرار گرفت. تیتر عفونت¬زایی نمونه ها نیز در بازه¬ زمانی (h 36-42) الی (h 90-96) در بالاترین سطح قرار گرفت. آزمایش PCR نیز مشخص نمود که میزان نسبی بیان ژن F در گروه های مورد آزمایش در بازه زمانی (h 36-48) پس از تلقیح بیشترین مقادیر را نشان داد. یافته های این مطالعه مشخص نمود که مناسب ترین زمان برای استحصال ویروس نیوکاسل به منظور ساخت واکسن در بازه زمانی (h 42-60) پس از تلقیح قرار دارد. کلمات کلیدی : ويروس بیماری نیوکاسل، تخم مرغ جنین دار، منحني رشد، EID50، Real-Time PCR
	:	Newcastle disease is a highly contagious disease that has a high degree of variation in the type and severity of symptoms. Nowadays, vaccination is the most appropriate method for preventing the disease, and in developing its vaccines, it is important to know the conditions for the growth and reproduction of the vaccine strains of the virus and its extraction time. The current research was designed to investigate the virus extraction time in embryonic eggs, inoculated with Newcastle virus vaccine V4 strain. One hundred microlitres of 10 3 dilution of Newcastle disease virus (AUS/ND/V4/1993) was inseminated as inoculum in allantoic cavity of 96 eggs and eggs were incubated at 37 ° C. During incubation, 6 hour intervals, 6 part groups of eggs were removed from the incubator and their allantoic fluid was cached for viral load. For this purpose, serologic tests for hemagglutination (HA) and infecting 50% of embryos (EID50) as well as real time RT-PCR were used. The results of this study indicated that the level of allantoic fluid hemagglutination in samples (36-42 h) to (90-96 h) after inoculation was appropriate for the selection of antigens. The infectious titers of the samples were placed at the highest level in the time interval (36-42 h) to (90-96 h). The PCR test also showed that the relative level of F gene expression in the tested groups at intervals (36-48 h) after inoculation showed the highest values. Findings of this study indicated that the most appropriate time for the extraction of Newcastle disease virus was to make vaccine at intervals (42-60 h) after inoculation.