|
" توليد نانوتوکسوئيد بتا کلستريديوم پرفرينجنز تيپ هايB،C و ارزيابي آن در شرائط برون تني "
عباسي، ابراهيم
| شماره شناسایی
|
:
|
18875910
|
| شماره مدرک
|
:
|
۶۲۵۰۴
|
| نام عام مواد
|
:
|
[گزارش نهایی -تجاری]
|
| شناسه افزوده
|
:
|
عباسي، ابراهيم
|
|
|
:
|
پرديس، عليرضا
|
|
|
:
|
پيله چيان لنگرودي، رضا
|
|
|
:
|
علي ملايي، مجتبي
|
|
|
:
|
امامي، تارا
|
|
|
:
|
تبيانيان، مجيد
|
|
|
:
|
عزتخواه، مجيد
|
|
|
:
|
توانگر رنجبر، عليرضا
|
| عنوان اصلي
|
:
|
توليد نانوتوکسوئيد بتا کلستريديوم پرفرينجنز تيپ هايB,C و ارزيابي آن در شرائط برون تني
|
| نام نخستين پديدآور
|
:
|
عباسي، ابراهيم
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
production of Clostridium perfringnes beta nano-toxoid and its invitro evaluation
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج: موسسه تحقيقات واکسن وسرم سازي رازي، ۱۴۰۱
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۶۲۵۰۴ مورخ ۱۴۰۱/۰۸/۲۵۶۲۵۰۴
|
|
|
:
|
شماره طرح : 2-18-18-064-960764
|
|
|
:
|
سامانه سمپات
|
| توصیفگر
|
:
|
کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ بی-نانوتوکسوئید-نانوتکنولوژی-نانوپارتیکل
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
در سالهای اخیر یک استراتژی بر پایه نانوپارتیکل ها نشان داده است که میتوان توکسین های پروتئینی غیر دناتوره را بمنظور ارتقاء پاسخ ایمنی مناسب بکار برد .به محض واکنش بین نانوپارتیکل ها و پروتئین (توکسین ) سمیت خود را از دست میدهد و دلیل آن این است که توکسین به لیگاند خود در سطح سلول نمی چسبد .نتایج کمپلکس نانوذرات و توکسین نشان می دهد که نانوپارتیکل ها رهایش داخلی توکسین را تسهیل می کنند .توکسین بتا کلستریدیوم پرفرنژنس توکسینی است که توسط تیپ B و C کلستریدیوم پرفرنژنس تولید میگردد و مهمترین بیماری ناشی از آن اسهال خونی بره های نوزاد است .وقتی که توکسین بتا با نانوذره کمپلکس تشکیل می دهد واکنش توکسین و نانوپارتیکل منجر به ایجاد شکل جدیدی از نانوپارتیکولات می شود که توکسین بدلیل درگیر شدن در آن، کشندگی خود را از دست می دهد لذا به توکسوئید تبدیل می شود.نانوذره استفاده شده در این تحقیق PLGA میباشد که بخاطر خواص جذابش بطور گسترده ای در اهداف دارو رسانی مورد استفاده قرار میگیرد .فرمولاسیون ناتوداروها به عواملی مانند سیستم پلیمری مناسب که بیشترین امکان کپسولاسیون را داراست، ارتقاء زیست تخریب پذیری و زمان احتباس دارو بستگی دارد. همچنین انتخاب نانوذره به اندازه نانوذره ، بار سطحی و آبگریزی آن بستگی دارد.در این تحقیق با توجه به مزایای متعدد PLGA که اشاره شد و با اتکاء به برخی مطالعات که حاکی از خصوصیات مطلوب آن برای تهیه نانوذرات میباشد تهیه و ساخت این نانوذره انجام شد .هدف از این تحقیق جدا سازی و تخلیص توکسین بتا کلستریدیوم پرفرنژنس و تولید کمپلکس آن با نانوذره PLGA به منظور تشکیل ساختمان غیر توکسیک میباشد .در این تحقیق توکسین بتا کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ B با روش ترسیب به کمک سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی از نوع Gel Filtration Chromatography جداسازسی شد .سنجش توکسین بطور درون تن (LD50) و برون تن توسط SDS page در هر مرحله انجام شد و میزان توکسین تخلیص شده 10mg/ml محاسبه شد .در این بررسی آنتی ژن توکسین بتا مبنای تهیه کاندید نانوتوکسوئید با فرمولاسیون نانوذره قرار گرفت .برای ساخت نانوذره از پلیمر PLGA و روش آب – روغن – آب استفاده شد .در شرایط بهینه نانو ذره فاقد انتی ژن با میانگین اندازه 100nm و پتانسیل زتای -23/8 mv و نانوذره حاوی آنتی ژن با میانگین اندازه 120nm و پتانسیل زتای -18/2mv تهیه گردید .تزریق PLGA بهمراه توکسین نشان داد که این کمپلکس از لحاظ بررسی ظاهری در موضع تزریق بدون علائم خاصی است و حیوان با دریافت این محلول علائم بیماری و بیحالی را نشان نمیدهد در واقع وقتی ذرات نانو همراه با توکسین بتا به موش تزریق میشوند شکل فضایی توکسین تغییر یافته و توکسین به یک توکسوئید تبدیل میگردد که عوارض توکسیسیتی نداشته و در واقع توکسین نمیتواند به گیرنده های خود متصل گردد و عوارض خود را آشکار سازد الگوی توکسین بتا و PLGA میتواند یک کاندید برای بررسی رها سازی و ایمن سازی حیوان هدف نیز مورد استفاده قرار گیرد بدین منظور میبایست مظالعات تکمیلی مانند حمل نانوذرات همراه توکسین توسط گلبولهای قرمز که توسط برخی از محققین بر روی توکسین های استافیلوکوک انجام شده است انجام گیرد. برای دستیابی به ساماندهی آنتی ژن با استفاده از پلیمرهای طبیعی مطالعه مقایسه ای بین انواع نانوذرات بر پایه پلیمرهای طبیعی توصیه میشود.
واژه های کلیدی :کلستریدیوم پرفرنژنس˛توکسین بتا˛ نانوپارتیکل˛ پلی(لاکتیک-کو-گلیکولیک اسید)
|
|
|
:
|
Abstract
In recent years, a nanoparticle-based strategy has shown that non-denatured protein toxins can be used to enhance the appropriate immune response. As soon as it reacts between the nanoparticles and the protein (toxin), it loses its toxicity because the toxin does not attach to its ligand at the cell surface. The results of the nanoparticle and toxin complex show that the nanoparticles facilitate the internal release of the toxin. Clostridium perfringens beta toxin is a toxin produced by Clostridium perfringens type B and C and diarrhea is the most important disease caused in newborn lambs. When beta toxin forms a complex with nanoparticles, the reaction between the toxin and the nanoparticle leads to the formation of a new form of nanoparticle in which the toxin loses its lethality due to its involvement; therefore, it becomes a toxoid. The nanoparticles used in this research are PLGA, one of the most developed biodegradable polymers. The aim of this studyis to isolate and purify Clostridium perfringens beta toxin and produce its complex with PLGA nanoparticles in order to form a non-toxic structure. In this study, toxin beta Clostridium perfringens type B was isolated using ammonium sulfate precipitation and gel filtration chromatography. Toxin assay was performed in vivo (LD50) and in vitro by SDS page at each stage and the quantity of purified toxin was calculated to be 10 mg/ml. Then, beta toxin antigen was used as the basis for the preparation of Nano toxoid candidate with nanoparticle formulation. PLGA polymer and water-oil-water method were used to make nanoparticles. Under optimal conditions, nanoparticles without antigen with an average size of 100 nm and zeta potential of -23.28 mv and nanoparticles containing antigen with an average size of 120 nm and zeta potential of -18.2 mV were prepared. When nanoparticles are injected into mice with beta toxin, the toxin becomes a toxoid that has no toxicity effects, and in fact the toxin cannot bind to its receptors and reveal its effects. In this study, the mice showed mild symptoms in one case and none of them died. The beta and PLGA toxin model could also be used as a candidate to study the release and immunization of the target animal. To achieve antigen regulation using natural polymers, a comparative study between nanoparticles based on natural polymers is recommended.
Keywords: Clostridium Perfringens, Beta Toxin, Nanoparticle, Poly (Lactic-co-glycolic Acid)
|
| |