رکورد قبلیرکورد بعدی

" توليد پروتئين فعال كننده tPA در ريزجلبك Dunaliella salina "


شماره شناسایی : 18875804
شماره مدرک : ۶۲۴۶۰
نام عام مواد : [گزارش نهایی -عادی]
شناسه افزوده : کدخدائي، سعيد
: صالحي جوزاني، غلامرضا
: خيام نکوئي، مجتبي
: حسيني، علي
: نيکبخت، علي
: خاتمي فر، مهدي
: صفرنژاد، محمدرضا
: فرهادي، خليل
: حجازي، محمدامين
: برزگري، ابوالفضل
: عباسعليزاده، سعيد
: مفيد، محمدرضا
: حجازي، محمدامين
عنوان اصلي : توليد پروتئين فعال كننده tPA در ريزجلبك Dunaliella salina
نام نخستين پديدآور : کدخدائي، سعيد
عنوان اصلي به زبان ديگر : -
وضعیت انتشار : کرج: پژوهشگاه بيوتکنولوژي کشاورزي، ۱۴۰۱
فروست : شماره ثبت ۶۲۴۶۰ مورخ ۱۴۰۱/۰۸/۱۷۶۲۴۶۰
: شماره طرح : 12-05-05-8802-89002
: سامانه سمپات
توصیفگر : پروتئین نوترکیب
: ریزجلبک
: فعال کننده پلاسمینوژن بافتی
: دونالیلا
خلاصه یا چکیده : در این تحقیق بررسی امکان تراریختگی در ریزجلبک (Dunaliella) و بررسی امکان ایجاد یک پلاتفورم بیانی جدید با استفاده از ریزجلبک برای تولید پروتئین‌های نوترکیب مورد مطالعه قرار گرفت. پس از طراحی و ساخت سازه‌های بیانی مورد نظر با استفاده از وکتورهای pCAMBIA، تراریختی این سازه‌ها از طریق روش‌های PEG، گلاس بید و الکتروپوریشن به داخل سلول‌های ریزجلبک صورت گرفت، که در این رابطه روش گلاس بید کارآیی بیشتری از خود نشان داد. بررسی تولید پروتئین نوترکیب از طریق روش‌های ELISA، وسترن بلات و آزمون زیست سنجی مورد مطالعه قرار گرفت که نهایتا غلظت tPA در کل پروتئین‌های محلول (TSP) به طور متوسط µg/mg 0.103 تعیین گردید. میزان بالاتر غلظت tPA بیان شده در این بررسی در مقایسه با مطالعات مشابه قبلی را می‌توان در رابطه با لحاظ نمودن ترجیح کدونی، استفاده از پروموتر قوی تر (Ubiquitin) و KDEL retention dsignal در سازه بیانی دانست. نمونه‌های تراریخته مثبت در محیط مایع غیر انتخابی رشد داده شدند، بطوریکه بیان tPA به صورت پایدار تا 50 نسل و در محیطی عاری از BASTA حفظ گردید. در عین حال، میزان بیان پروتئین مورد نظر هنوز کم بوده و نیاز به بهینه‌سازی بیشتر شرایط مختلف بالادست و پائین دست جهت افزایش بیان می باشد.
: Microalgae systems have opened up new platforms for molecular farming in closed conditions. Recently, Dunaliella salina has been considered to be a suitable expression host for the production of recombinant proteins due to its significant advantages. It is a unicellular eukaryotic organism lacking cellwall and having post-translational processing for proteins which can grow in high salinity environments. To construct an expression vector, different fragments including Ubiquitin promoter, the gene of interest (tPA;K2 and S domains), Omega leader sequences, KDEL, 6-Histidine tag, SYQ and Nos terminator (as the stop signal for gene transcription) were considered in upstream strategy. pCAMBIA 3301 and 1304 plasmids which contained bar gene (phosphinothricin resistance gene as a plant selectable marker) were used as the framework for construction of the expression vector and driving the expression of gene of interest. Constructs were used for transferring of tPA gene into microalgae, D. salina, the results indicated successful transmission of foreign gene and production of detectable amount of recombinant protein in transgenic microalgae.
آدرس ثابت

پیشنهاد خرید
پیوستها
عنوان :
نام فایل :
نوع عام محتوا :
نوع ماده :
فرمت :
سایز :
عرض :
طول :
نظرسنجی