رکورد قبلیرکورد بعدی

" جدا سازی mRNA و cDNAو بیان ژنی توکسین (ها) به صورت پلازمید نوترکیب در سویه E.Coli و بررسی خصوصیات پپتید حاصل از بیان ژن "


شماره شناسایی : 18868222
شماره مدرک : ۶۰۱۰۹
شناسه افزوده : زارع میرک آبادی، عباس
: ربیعی، هادی
: بیات زاده، محمدعلی
: کردزنگنه، امیرمحمد
: هدایت، علی
: نظری، علی
عنوان اصلي : جدا سازی mRNA و cDNAو بیان ژنی توکسین (ها) به صورت پلازمید نوترکیب در سویه E.Coli و بررسی خصوصیات پپتید حاصل از بیان ژن
عنوان اصلي به زبان ديگر : :Isolation of specific mRNA , cDNA formation and Gene expression in recombinant E.coli and charactrisation of recombinant peptide of Androctonus crassicauda Mammalian Toxin(s)
صفحه شمار : ۱۱۷ ص.:مصور، جدول، نمودار
وضعیت انتشار : کرج: موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی ، ۱۳۹۹
فروست : شماره ثبت ۶۰۱۰۹ مورخ ۱۴۰۰/۰۶/۰۲۶۰۱۰۹
: شماره طرح ۹۷۰۰۴۵-۹۶۰۴۳-۰۰۳-۱۸-۱۸-۱۲
: شماره نامه: سامانه سمپات
: این طرح: ترویجی است
خلاصه یا چکیده : ساختار مورفولوؤیک عقرب ها در طول چهارصد میلیون سال اخیر تغییرات اندکی داشته است. سموم عقرب ها مجموعه ای پیچیده از اجزاء فعال زیستی است که با تاثیر بر کانالهای یونی به عنوان مهمترین ناحیه هدف، عملکرد دارند. عقرب های خطرناک دارای سم α با پپتیدهایی زنجیر بلند و چهار پل دی سولفیدی موثر بر کانالهای سدیم می باشند. برمبنای اهمیت کلینیکی سم عقرب Androctonus crassicauda، مطالعه حاضر با هدف جداسازی، تعیین هویت مولکولی و شرح عملکرد یکی از پپتیدهای نوروتوکسین فعال سم این عقرب در ایران انجام شده است.عقرب مورد نظر در جنوب غرب کشور جمع آوری و سم گیری توسط شک الکتریکی انجام شد. سم در سیستم کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون برده شد و جهت تفکیک بیشتر در سیستم RP-HPLC به خلوص بالاتری رسید. در ادامه mass spectrometry و تعیین توالی اسیدآمینه ای و بررسی های بیوانفورماتیک انجام شد. سپس برمبنای cDNA پپتید سمی، بررسی بیان ژنی در وكتورهای pET32a+ و pMal-c5X و سویه پذیراشده E.coli RG2 انجام شد. تخلیص پروتئین توسط رزین Ni-NTA و رزين آميلوز انجام و در آزمايش SDS-PAGE و سپس وسترن بلاتينگ مورد تایید قرار گرفت. بررسی عملکرد بر روی کاناهای سدیمی با تست الکتروفیزیولوژی انجام شد. در دو پروژه قبلی بعد از جداسازی فراکسیون سمی از ستون ژل فیلتراسیون نسبت به خالص سازی فراکسیون نوروتوکسین از ستون RP-HPLC اقدام شد. بدست آوردن Mass پپتید به میزان 7255.23 دالتون با LD50 برابر با 0.59 0.03 ميكروگرم در موش و توالی یابی پپتید 85 اسیدآمینه ای انجام شد. مطالعه فیلوژنتیک پپتید، نزدیکی به منطقه خاورمیانه را نشان میداد. بررسی ساختار سوم پروتئینی و شناسایی نحوه ی میانکنش با کانالهای سدیمی، نشان دهنده α توکسین بودن سم بود. بررسی پروتئین بیان شده فعال از نظر بیولوژیک با تاثیر بر روی کانال سدیمی وابسته به ولتاژ Na+V1.7 و ایجاد تاخیر در غیرفعالسازی سریع کانال باعث ادامه دار بودن جریان یون سدیم می شد.در نتیجه پس از بررسی صحت بیان ژنی و تولید پروتئین نوترکیب سم عقرب بصورت عملکردی و با توجه به آنالیز های بیوانفورماتیک ساختار سوم پروتئینی سم، برای اولین بار پپتید سمی با نام AnCra1 بعنوان یک نوروتوکسینα با قابلیت تاثیر بر کانال سدیمی دریچه دار وابسته به ولتاژ معرفی گردید. کلید واژه: عقرب Androctonus crassicauda، نوروتوکسین، ساختار سوم پروتئین، بیان ژن، کانال سدیمی
: Scorpion venoms are highly complex polypeptides with a wide spectrum of bioactivities. Scorpions dangerous to mammals contain a large number of peptides and toxins with 58–86 amino acid residues and the ‘long-chain’ peptides are responsible for the neurotoxic symptoms developed during scorpion envenomation, and related to the impairment of the function of Na+ channels. Buthidae family of scorpions are considered as dangerous and medically important species. Androctonus crassicauda (A. crassicauda) is a dangerously venomous species that belongs to the Buthidae family and widely distributed species in the Middle East, especially Iran. To the best of our knowledge no report has been published on the toxins present in the venom of Iranian scorpion A. crassicauda. The aim of this study is purification, sequence determination and molecular modeling of AnCra1 toxin and compare with the Na+V blocker toxins already identified and characterized. Phylogenetic relationship of AnCra1 and other ion channel toxins from Buthidae family, determined. Here, we have optimized and expressed of the a-toxin AnCra1 and describe the interaction with NaV channels.The crude venom was initially purified by size exclusion chromatography followed by further separation using (RP)-HPLC, The mass spectra of the purified peptides were obtained the sequence of the amino acids of this new peptide was determined. Total RNA was extracted The PCR product was digested and cloned into pET32a and pMal-c5X. The homology study was performed using the bioinformatics programs. Voltage-gated sodium channels electrophysiological recordings was performed for recombinant toxin. Crude venom was fractionated using a size exclusion column. Fraction F5F6 were fund to be toxic fractions. Toxic sub-fraction F62 and selected for additional extra purification by RP-HPLC on a C18 column. Direct Edman degradation revealed the full amino acid residues. The AnCra1 molecular mass experimentally determined about 7255.23 Da. When we compared AnCra1 with other mammalian toxins it was found 97% homology with the long mammalian neurotoxins. AnCra1 toxin has close relationship with alpha-toxin Morocco and southern Israel. As the electrophysiological tests showed a significant effect of AnCra1on hNav1.7, it could be claimed that toxin is a-toxins active on mammalian NaV channel.This study describes one new alpha-scorpion toxin from A. crassicauda in terms of its gene, protein product and pharmacological function. Here we show the recombinant AnCra1 toxin affects Na+-channel permeability and have biological activity.Keyword: Androctonus crassicauda ,Neurotoxin, Gene cloning , sodium Chanel
آدرس ثابت

پیشنهاد خرید
پیوستها
عنوان :
نام فایل :
نوع عام محتوا :
نوع ماده :
فرمت :
سایز :
عرض :
طول :
نظرسنجی