|
" تولید و ارزیابی بیومکمل‌های حاوی آنتی بادی اختصاصی زرده تخم مرغ (IgY) و پروبیوتیکها در پیشگیری بیماری سالمونلا (تیفیموریوم و انتریتیدیس) در مدل حیوانی "
| شماره شناسایی
|
:
|
18864622
|
| شماره مدرک
|
:
|
۵۸۲۵۷
|
| نام عام مواد
|
:
|
[گزارش نهایی -ویژه]
|
| شناسه افزوده
|
:
|
مژگانی، ناهید
|
|
|
:
|
خاکی، پژواک
|
|
|
:
|
رضایی‌مکرم، علی
|
|
|
:
|
تبیانیان، مجید
|
|
|
:
|
صالحی نجف‌آبادی، زهرا
|
|
|
:
|
مرادی، سهیلا
|
| عنوان اصلي
|
:
|
تولید و ارزیابی بیومکمل‌های حاوی آنتی بادی اختصاصی زرده تخم مرغ (IgY) و پروبیوتیکها در پیشگیری بیماری سالمونلا (تیفیموریوم و انتریتیدیس) در مدل حیوانی
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
:Production and analysis of biotheraputic supplements containing Egg yolk specific antibodies (IgY) and Probiotic for prevention of Salmonella (typhimurium and enteritidis) in animal
|
| صفحه شمار
|
:
|
۹۳ ص.:مصور، عکس(رنگی)، جدول، نمودار
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج: موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، ۱۳۹۸
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۵۸۲۵۷ مورخ ۱۳۹۹/۰۶/۳۱
|
|
|
:
|
شماره طرح ۹۶۰۳۹۷-۰۲۵-۱۸-۱۸-۲
|
|
|
:
|
شماره نامه: سامانه سمپات
|
|
|
:
|
این طرح: بنیادی است
|
|
|
:
|
۵۸۲۵۷
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
سالمونلا یکی از مهمترین بیماری‌های باکتریایی طیور می‌باشد که قابل انتقال به انسان است و از نظر اقتصادی نیز حائز اهمیت می‌باشد. بيشتر سویه‌های سالمونلا مانند سالمونلا انتریدیتیس و سالمونلا تیفیموریوم یک تهدید برای سلامت عمومی هستند. اقدامات پیشگیرانه در مقابل عفونت سالمونلا تاثیرات اقتصادی مهمی دارد. استفاده از آنتی‌بیوتیک‌های محرک رشد احتمالاً در آینده محدودتر می‌شود. این شرایط چالش بسیار بزرگی را در صنعت طیور ایجاد می‌کند و منجر به وقوع بیشتر بسیاری از بیماری‌ها از جمله سالمونلا می‌شود. بنابر‌این کمیته‌های علمی درصدد شناسایی جایگزین‌های جدید برای آنتی‌بیوتیک به منظور بهبود عملکرد پرندگان و همچنین جلوگیری از گسترش باکتری‌های زونوتیک که برای سلامت انسان مهم می‌باشند، هستند. بعضی از محصولات جایگزین مانند اسیدهای آلی، گیاهان دارویی، پروبیوتیک، پری‌‌بیوتیک‌ها و آنتی‌بادی اختصاصی زرده تخم‌مرغ در درمان این بیماری‌ها به طور متغیری موثر می‌باشند. ایمنی درمانی خوراکی (ایمنی غیرفعال) با استفاده از آنتی‌بادی‌ها اخیراً توجه زیادی به خود جلب کرده و به نظر می‌رسد به دلیل اختصاصی بودن، این رهیافت جایگزین موثری برای آنتی بیوتیک‌ها باشد. ایمنوگلبولین Y می‌تواند به راحتی تولید و با بازده بالایی از زرده با روش‌های مختلف به عنوان روش‌های ارزان و مطمئن تخلیص شود و به منظور کنترل و جلوگیری از عفونت‌های ویروسی و باکتریایی و در برابر توکسین‌ها در حیوانات مزرعه استفاده گردد.در این تحقیق با ایمونیزاسیون مرغ‌های تخم‌گذار بر علیه باکتری سالمونلا انتریدیتیس و سالمونلا تیفی موریوم، آنتی بادی‌های اختصاصی بر علیه این پاتوژن ها تولید شد. در آزمایش اول 40 قطعه مرغ تخم‌گذار لگهورن سفید با دُز کامل هر دو باکتری سالمونلا ایمن شدند. نمونه‌های خونی هر دو هفته یکبار به دنبال تزریق واکسن تهیه شدند. اولین تزریق واکسن در سن 27 هفتگی و به همراه ادجوانت کامل فروند و تزریق‌های بعدی هر دو هفته یکبار و به همراه ادجوانت ناقص فروند انجام شد. حجم هر تزریق 1 میلی‌لیتر بودکه به دو ناحیه از عضله سینه (M. Pectoralis) تزریق شد. پس از از اولین واکسیناسیون، تخم‌مرغها روزانه جمع آوری شدند. در طول دوره ایمونیزاسیون، فعالیت آنتی‌بادی ضد آنتی ژن‌های تک ظرفیتی (SE یا ST) و آمیخته آنتی ژن (SE+ST) در زرده با استفاده از تست الایزا و آزمایش آگلوتیناسیون تعیین شد. تیتر آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آنتی ژن‌های تک ظرفیتی (SE یا ST) و آمیخه آنتی ژن (SE+ST) در زرده و سرم بعد از اولین ایمونیزاسیون افزایش یافت و این افزایش تا 12 هفتگی در سطح بالایی حفظ گردید. بالاترین تیتر آنتی بادی در نمونه‌های زرده و سرم مربوط به تست الایزا به ترتیب 8 و 6 هفته بعد از نخستین تزریق مشاهده شد و در مورد آزمایش آگلوتیناسیون حداکثر تیتر زرده 6 هفته بعد از اولین ایمونیزاسیون مشاهده شد. برای تعیین تیتر آنتی‌بادی در سرم آزمایش ویدال هم انجام شد که حداکثر تیتر آنتی‌بادی در گروه‌های چالشی همراه با آنتی بادی در 8 هفته بعد از اولین ایمونیزاسیون مشاهده شد. در صد تست کراس (Percentage cross reactivity) آنتی بادی سالمونلا انتریدیتیس با آنتی ژن سالمونلا تیفیموریوم %90 بود. درصد تست کراس آنتی بادی سالمونلا تیفیموریوم با آنتی ژن سالمونلا انتریدیتیس %92 مشاهده شد. اثر مهارکنندگی آنتی بادی‌های تک ظرفیتی و آمیخته آنتی بادی بر رشد سالمونلا ها (SE یا ST) در محیط مایع مورد آزمون قرار گرفت. در ساعتهای ابتدایی آنتی بادی‌های تک ظرفیتی (SE یا ST) و آمیخته آنتی بادی (SE+ST) تأثیر قابل توجهی بر مهار رشد باکتری نداشتند اما با گذشت زمان انکوباسیون رشد باکتری در گروه¬های آنتی بادی‌های تک ظرفیتی و آمیخته آنتی بادی نسبت به گروه شاهد کاهش یافت. در آزمایش دوم 8 نوع باکتری های اسید لاکتیک پروبیوتیکی بر علیه سالمونلا انتریدیتیس و سالمونلا تیفیموریوم با روش حفرهای(Agar well diffusion assay) آزمایش شدند و چهار سویه لاکتوباسیلوس کازیی، لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس، لاکتوباسیلوس رامنوسس و انتری کوکوس فاسیوم که بیشترین اثرات ضد میکروبی را بر علیه این پاتوژن نشان دادند جهت مطالعات بعدی انتخاب شدند.در بخش سوم آزمایش تعداد 243 قطعه جوجه گوشتي در 9 تیمار، 3 تکرار و 9 قطعه جوجه در هر تکرار تقسیم و نگهداری شدند و در سن 3 روزگی آنتی بادی‌های تک ظرفیتی (SE یا ST) و مخلوط هر دو آنتی بادی (SE+ST)، پروبیوتیک و آنتی‌بادی اختصاصی همراه با پروبیوتیک را در شش گروه دریافت کردند دو گروه دیگر به عنوان شاهد در نظر گرفته شد (CE، CT). چالش با سویه‌های (SE یا ST) در سن 6 روزگی انجام گرفت که تمام پرندگان آزمایشی با 5 /0 میلی‌لیتر از تعلیق (SE یا ST) به روش گاواژ دهانی چالش داده شدند. از نظر بازیابی (SE یا ST) در لوزه‌های سکومی در روز 1 و 4 بین گروه‌های چالشی همراه IgY با گروه شاهد اختلاف معنی-داری وجود نداشت اما در روز 7، استقرار (SE یا ST) در لوزه سکومی در گروه‌های چالشی همراه IgY نسبت به گروه شاهد کمتر بود (05 /0>P). در بین آنتی بادی‌های تک ظرفیتی گروه AbST-ST بیشترین رشد باکتری را نشان داد (p ˃0.05). واژه‌هاي كليدي: سالمونلا انتریدیتیس، سالمونلا تیفیموریوم، آنتی بادی IgY، پروبیوتیک، مرغ تخم گذار، جوجه‌های گوشتی
|
|
|
:
|
Salmonella is one of the most important bacterial disease of poultry that can be transmitted to humans and is also economically important. Mostly, Salmonella typhimurium and Salmonella enteriditis are considered public health threat. Preventive measures against Salmonella infections have important economical implications. The use of growth promoting antibiotics is likely to be limited in futures which could create great challenges in poultry industry that could lead to the occurrence of more diseases including Salmonella. Hence, scientific committees are in seek of novel antibiotic alternatives that could improve bird performance and also prevent the spread of zoonotic bacteria that are important for human health. Some of these alternatives including organic acids, herbal medicine, probiotics, prebiotics, and egg yolk antibody IgY are effective against these diseases. Oral immunotherapy with the use of these antibodies have presently received a lot of attention and it seems that because of its specificity it could be an effective alternative to antibiotics. Immunoglobulin Y could be easily produced and could be purified from the egg yolk with different methods and could be used for the control and prevention of bacterial, viral infections and against toxins in animals. In this research by immunizing egg laying hens against heat killed S.typhimurium and S.enteriditis, specific IgY antibodies against these pathogens were produced. In first experiments, 40 egg laying White Longhorn hen were immunized at the age of 27 weeks injected with I ml of heat killed salmonella antigens with Freunds complete antigen and later immunized once every two weeks with incomplete adjuvant. Blood samples were collected once every two weeks after immunizations and eggs were collected daily. The antibody titers in the serum and egg yolk of the birds were analyzed by ELISA and agglutination method. The antibody titers against monovalent antigens (SE or ST) and combined antigens (ST+SE) in egg yolk and in serum samples showed increase in titers immediately after the first vaccination that was at its maximum by 12 weeks. Highest titers in these samples were achieved after 6 and at 8 weeks after the first immunization. In agglutination, high titers were recorded after 6 weeks of immunization. SE showed 90% cross reactivity with ST, while ST showed 92% cross reactivity with SE. The antibacterial activity of these antibodies against the pathogens was determined in broth medium. During initial hours, the monovalent and bivalent antibodies had no significant effect on the growth of pathogens however, the growth of the pathogens was decreased in the presence of these antibodies compared to control samples, with the passage of time.In second experiments, 8 different probiotic strains were studied for their antibacterial activity against the mentioned Salmonella pathogens by agar well diffusion assay. The bacterial species including Lactobacillus casei, L.acidophilus, L.rhamnosus,and E.faecium showed the highest antibacterial activity against these pathogens and were selected for further studies. In third experiments, 243 broiler male chicks (Ross 308) were selected and divided into 9 treatment groups, with 3 repeats and 9 chicks in each group. The chicks received probiotic from the first day while at the age of 6 days after 6 hrs of challenge with salmonella, they were orally gavaged with 200ul of antibodies. The chicks received three doses of antibodies later at 12, 24, and 48 hours. The salmonella counts in the caecum after 1 and 4 days in the treatment groups recieivng antibodies or probiotic was not significant however, at 7 days the count of salmonella was decreased in the caecum of groups receiving antibodies and probiotics, compared to groups reciving alnoe antibody or probiotics (p ˃0.05).
|
| |